醋酸纤维素是提甲基纤维素的甲基乙酰化产生的甲基纤维素冰醋酸酯。由该物质做成的塑料薄膜称之为醋酸纤维素塑料薄膜。这类塑料薄膜对蛋白试品吸附力小,基本上能彻底清除纸电泳中出現的“拖尾”状况,又由于膜的吸水性较为小,它所容下的缓冲溶液也少,电泳原理时电流量的绝大多数由试品传输,因此分离出来速度更快,电泳原理时间较短,试品使用量少,5μg的蛋白可获得令人满意的分离出来实际效果。因而非常合适于病理学状况下少量出现异常蛋白质的检验。
醋酸纤维素膜历经冰醋酸乙醇溶液或其他全透明液解决后可使膜透明度有益于对电泳图谱的吸光扫描仪测量和膜的长期性储存。
⒈原材料与实验试剂醋酸纤维素膜一般应用市面上产品,常见的电泳原理缓冲溶液为pH8.6的巴比妥缓冲溶液,浓度值在0.05-0.09mol/L。
⒉实际操作关键点
⑴膜的预备处理:务必于电泳原理前将脉冲阻尼器侵泡于缓冲溶液,浸湿后,取下脉冲阻尼器并且用过滤纸吸去不必要的缓冲溶液,不能吸后过干。
⑵加样:试品使用量依试品浓度值、自身特性、上色方式及检验方式等要素决策。对血细胞蛋白的基本电泳分析,每cm加样线不超过1μl,等同于60-80μg的蛋白。
⑶电泳原理:可在室内温度下开展。工作电压为25V/cm,电流量为0.4-0.6mA/cm宽。
⑷上色:一般蛋白上色常应用羟基黑和丽春红,糖蛋白用甲苯胺蓝或过碘酸-Schiff实验试剂,蛋白则用苏丹黑或品红亚硫酸上色。
⑸褪色与全透明:对水溶染剂最广泛运用的脱色剂是5%冰醋酸溶液。以便长期性储存或开展吸光扫描仪测量,可渗入冰醋酸:无水乙醇=30:70(V/V)的全透明液中。